جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی

چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(scf)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(hscs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان scf در میزبان بیانیrosetta  بود. rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و روش ها مطالعه انجام از نوع تجربی بود. rna تام از سلول های hela استخراج و به دنبال آن cdna ساخته شد. توالی رمزکننده­ scf ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pet-32a در e.coli top 10 همسانه سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله pcr ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی rosetta تراریخت شد. بیان  scf نوترکیب در حضور iptg القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hscf) با sds-page و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد. یافته ها توالی رمزکننده scf با موفقیت از سلول های hela جداسازی و در وکتور بیانی pet-32a همسانه سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی rosetta انجام شد. نتیجه گیری در سیستم بیانی rosetta ، امکان تولید پروتئین های یوکاریوتی با کدون های نادر مثل agg ، aga ، aua ، cua ، ccc و gga وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می شود.